油红O染色

一．实验原理

以油红O溶液染色是鉴定间充质干细胞向成脂细胞分化的一个重要指标。用特定的成脂诱导培养基培养一段时间后，间充质干细胞可分化为成脂细胞，并在细胞中形成脂滴。油红 O属于偶氮染料，是很强的脂溶剂和染脂剂，与甘油三酯结合呈小脂滴状。脂溶性染料能溶于细胞中的脂滴。当染料加入细胞中，染料则离开染液而溶于细胞内的脂滴中，使细胞内的脂滴呈红色或橘红色。

二．实验步骤

1. 油红O工作液制备：油红储备液与dd water按照3:2的比例进行稀释，混匀后室温静置10min，滤纸过滤；

2. 移除孔内培养基，每孔加入3ml PBS静置1min后移除，洗涤2次；

3. 每孔加入3ml 4%多聚甲醛，37℃（或室温）固定0.5h；

4. 移除固定液，每孔加3mlPBS冲洗，洗涤2次；

5. 每孔加入油红工作液3ml，37℃（或室温）染色20min；

6. 每孔加入60%异丙醇3ml，快速移除，根据染色背景情况可重复一次；

7. 每孔加PBS 3ml,洗2次；

8. 每孔滴入若干滴甘油保存。