血管形成

一、实验原理：

血管形成实验是测量在体外血管生成的一种快速的、可量化的方法。

一般做的比较多的是研究内皮细胞的血管形成。在体外,内皮细胞接种在一定基底上,易形成网状结构,可通过拍照观察计数对血管结果进行定量分析。

体外血管形成实验的研究基于研究认为肿瘤新生血管是一个有价值的治疗靶点,抗肿瘤新生血管研究已经成为肿瘤学中的一个研究热点,血管生成在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用。

在体内,血管生成是从已有的毛细血管或毛细血管后静脉发展而形成的新的血管,其对于机体器官生长、胚胎发育和伤口愈合在内的多个过程具有十分重要的作用。

肿瘤血管生成是一个极其复杂的过程,包括血管内皮基质降解、内皮细胞移行、内皮细胞增殖、内皮细胞管道化分支形成血管环和形成新的基底膜等步骤。研究表明无论是原发性肿瘤还是继发性肿瘤,其直径一旦超过2 mm,都会有血管的生成,这是由于肿瘤细胞自身可分泌出多种生长因子,这些生长因子可以诱导血管的生成,抑制这一过程将能明显阻止肿瘤组织的发展和扩散转移,因此体外血管形成实验广泛应用于抗肿瘤药物的研究中。

二、实验方法

1. 预冷：4℃过夜融化matrigel胶，预冷24孔板和枪头；

2. 铺胶：每孔200μL加至24孔板，低速无菌离心除去气泡，37度孵育30~60min；

3. 细胞接种：取处理好的备用细胞生长状态良好的细胞，0.25 % 胰酶消化后，用无血清培养基制成单细胞悬液，计数后，按照每孔1×10⁵/个细胞，将细胞均匀的接种到预铺有基质胶的24孔板中，37℃、5%CO₂饱和湿度条件培养；

4. 2h即可开始观察是否成管(100X)。