一、 收到细胞后应该有哪些注意事项？

显微镜下观察细胞状态，看是否有细胞脱落、漏液和污染等异常情况，然后仔细阅读产品说明书，因不同品牌、不同种属、不同类型的细胞其培养技巧存在些许差别，客户收到细胞后，请务必仔细阅读随货附赠的说明书，切记不可仅凭经验操作。

通常，我们可以从说明书中获取以下重要信息：

1、细胞数目 2、细胞增殖能力 3、推荐培养基、培养器皿及包被液 4、推荐接种密度5、复苏、培养、传代等操作步骤6、运输、储存及培养条件

二、细胞传代

1. 细胞的密度达到80%时，对细胞进行传代；

2. 弃去培养基，用PBS洗一遍；

3. 加1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化细胞，显微镜下观察，消化1-2min，可看到细胞相互分离变圆，即消化完成；

4. 快速弃去胰酶，加入完全培养基，吹打细胞，制成单细胞悬液，按1：2的比例传代，37℃、5% CO2饱和湿度条件下扩大培养。

三、细胞冻存

1. 取处于对数生长期，生长状态良好的细胞，加1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化细胞，显微镜下观察，消化1-2min，可看到细胞相互分离变圆，即消化完成；

2. 快速弃去胰酶，加入完全培养基，吹打细胞，制成单细胞悬液，1000rmp 离心5 min，去上清；

3. 加入细胞冻存液（60%FBS+30%培养基+10%DMSO）重悬细胞，将悬液加入冻存管中；

4. 将冻存管放入梯度冻存盒，-80℃放置过夜后将冻存管转入液氮中长期保存。

四、细胞复苏

1. 将细胞从液氮中取出，快速放入37°C水浴锅中，轻摇冻存管使冻存液溶解；

2. 溶解后把1ml细胞悬液转移到含有3ml培养基的离心管中，离心收集细胞，室温1000rmp 离心5 min，弃上清；

3. 用含10%胎牛血清的完全培养基悬浮细胞，接种到培养皿中，轻轻吹打混匀，37℃、5% CO2饱和湿度条件下培养。