一、收到细胞后应该有哪些注意事项?
显微镜下观察细胞状态,看是否有细胞脱落、漏液和污染等异常情况,然后仔细阅读产品说明书,因不同品牌、不同种属、不同类型的细胞其培养技巧存在些许差别,客户收到细胞后,请务必仔细阅读随货附赠的说明书,切记不可仅凭经验操作。
通常,我们可以从说明书中获取以下重要信息:
1、细胞数目
2、细胞增殖能力
3、推荐培养基、培养器皿及包被液
4、推荐接种密度
5、复苏、培养、传代等操作步骤
6、运输、储存及培养条件
二、细胞传代
1. 细胞的密度达到80%时,对细胞进行传代;
2. 弃去培养基,用PBS洗一遍;
3. 加1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化细胞,显微镜下观察,消化1-2min,可看到细胞相互分离变圆,即消化完成;
4. 快速弃去胰酶,加入完全培养基,吹打细胞,制成单细胞悬液,按1:2的比例传代,37℃、5% CO2饱和湿度条件下扩大培养。
三、细胞冻存
1. 取处于对数生长期,生长状态良好的细胞,加1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化细胞,显微镜下观察,消化1-2min,可看到细胞相互分离变圆,即消化完成;
2. 快速弃去胰酶,加入完全培养基,吹打细胞,制成单细胞悬液,1000rmp 离心5 min,去上清;
3. 加入细胞冻存液(60%FBS+30%培养基+10%DMSO)重悬细胞,将悬液加入冻存管中;
4. 将冻存管放入梯度冻存盒,-80℃放置过夜后将冻存管转入液氮中长期保存。
四、细胞复苏
1. 将细胞从液氮中取出,快速放入37°C水浴锅中,轻摇冻存管使冻存液溶解;
2. 溶解后把1ml细胞悬液转移到含有3ml培养基的离心管中,离心收集细胞,室温1000rmp 离心5 min,弃上清;
3. 用含10%胎牛血清的完全培养基悬浮细胞,接种到培养皿中,轻轻吹打混匀,37℃、5% CO2饱和湿度条件下培养。