流式焦亡
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流式焦亡
一、实验原理:
细胞焦亡(Pyroptosis)又称细胞炎性坏死,是程序性细胞死亡的一种,主要通过炎症小体介导包含半胱天冬酶-1(Caspase-1)在内的多种Caspase的激活,Caspases通过切割gasermin D(GSDMS)的氨基端和羧基端的连接体,造成细胞穿孔,进而引起细胞死亡。
二、实验方法
1. 细胞培养所需时间后,收集细胞,1200rpm,5min离心,去上清,加300μl PBS重悬;
2. 转移290μl细胞悬液至新的EP管中,加入10μl 30X FLICA溶液,37℃避光孵育1h,每20min轻轻混匀一次(同时设阴性对照,即正常细胞不加FLICA和PI;阳性对照1,以凋亡效果最明显的溶剂组作为阳性对照,只加FLICA单标;阳性对照2,以凋亡效果最明显的溶剂组作为阳性对照,只加PI单标。);
3. 孵育1h后,加入1ml 1X Apoptosis Wash Buffer,混匀,1200rpm,5min离心,弃上清;
4. 用1X Apoptosis Wash Buffer将细胞再润洗1次,1200rpm,5min;
5. 加入400μl 1X Apoptosis Wash Buffer重悬细胞,放置冰上;
6. 流式检测前,加入2μl PI,混匀;
7. 流式细胞仪上机检测。