划痕

一、实验原理：

细胞迁移即细胞划痕法，是测定细胞迁移运动与修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型。在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，用微量枪头或其他硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间，取出细胞培养板，观察周边细胞是否生长至中央划痕区，以此判断细胞的生长迁移能力，实验通常需设定正常对照组和实验组，实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等组别，通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力，可以判断各组细胞的迁移与修复能力。

当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。。

二、实验方法

1. 先用marker笔在3.5cm皿背后用直尺比着，均匀地划横线，大约每隔0.5-1cm一道；

2. 取处于对数生长期，生长状态良好的XXX细胞，0.25%胰酶分别消化计数约为5×105个细胞，接种于3.5 cm皿，37℃、5%CO2饱和湿度条件培养过夜 ；

3. 待细胞密度达到90%左右，铺满3.5 cm皿底部，用200 μl的枪头比着直尺，尽量垂直于背后的横线划痕，枪头要垂直，不要倾斜；

4. 用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入无血清培养基（若研究的是药物对细胞的一个作用的话，培基中可加入药物处理），显微镜下观察并拍照作为0h图片；

5. 按照实验分组，在37 ℃、5% CO2条件下培养；

6. 48h后，显微镜下拍照观察细胞迁移情况，作为48h图片。