划痕
产品编号 | 产品名称 | 规格 | 价格 |
---|
划痕
一、实验原理:
细胞迁移即细胞划痕法,是测定细胞迁移运动与修复能力的方法,类似体外伤口愈合模型。在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上,用微量枪头或其他硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央部分的细胞,然后继续培养细胞至实验设定的时间,取出细胞培养板,观察周边细胞是否生长至中央划痕区,以此判断细胞的生长迁移能力,实验通常需设定正常对照组和实验组,实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等组别,通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力,可以判断各组细胞的迁移与修复能力。
当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。。
二、实验方法
1. 先用marker笔在3.5cm皿背后用直尺比着,均匀地划横线,大约每隔0.5-1cm一道;
2. 取处于对数生长期,生长状态良好的XXX细胞,0.25%胰酶分别消化计数约为5×105个细胞,接种于3.5 cm皿,37℃、5%CO2饱和湿度条件培养过夜 ;
3. 待细胞密度达到90%左右,铺满3.5 cm皿底部,用200 μl的枪头比着直尺,尽量垂直于背后的横线划痕,枪头要垂直,不要倾斜;
4. 用PBS洗细胞3次,去除划下的细胞,加入无血清培养基(若研究的是药物对细胞的一个作用的话,培基中可加入药物处理),显微镜下观察并拍照作为0h图片;
5. 按照实验分组,在37 ℃、5% CO2条件下培养;
6. 48h后,显微镜下拍照观察细胞迁移情况,作为48h图片。