冯库萨染色

一．实验原理

成骨分化是干细胞分化潜能的一个方向。用特定的成骨诱导培养基培养一段时间后，干细胞可分化为成骨细胞，并在细胞表面沉积钙盐，形成钙结节。冯库萨染色法是染色矿化结节的经典方法,其原理是利用硝酸银与钙盐的复分解反应形成可被还原的银盐,在强光或紫外光下生成金属银。

二．实验步骤

1. 移除孔内培养基，每孔加入3ml PBS静置1min后移除；

2. 每孔加入3ml 4%多聚甲醛，37℃（或室温）固定0.5h；

3. 移除固定液，每孔加3ml PBS冲洗，洗涤1次；

4. 每孔加入5%硫代硫酸钠3ml，37℃（或室温）静置30min；

5. 双蒸水洗涤2次，3ml每孔；

6. 每孔加1%硝酸银3ml，紫外下开盖照射30min；

7. 双蒸水冲洗，每孔3ml，洗2次后观察。