TRAP染色

一．实验原理

TRAP是鉴定破骨细胞的一个重要指标。通过特定的破骨诱导培养基诱导培养一段时间后，骨髓来源单核细胞可被诱导分化为破骨细胞。抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)为破骨细胞的特异性标志酶，特异地分布于破骨细胞的胞浆。加入TRAP染色液后，细胞胞浆呈紫色或紫红色。

二． 实验步骤

1. 固定液恢复至室温，去离子水和TRAP工作液放在37℃水浴锅内预热；

2. 移除孔板内培养基，每孔加入200ul PBS洗一次；

3. 每孔加入固定液100ul，室温30sec移除；

4. 每孔加入200ul去离子水洗一次；

5. 每孔加入TRAP工作液100ul避光37℃（或室温）孵育15min-1h；

6. 每孔加200ul去离子水洗，3次；

7. 每孔滴入1滴甘油保存。