TRAP染色
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TRAP染色
一.实验原理
TRAP是鉴定破骨细胞的一个重要指标。通过特定的破骨诱导培养基诱导培养一段时间后,骨髓来源单核细胞可被诱导分化为破骨细胞。抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)为破骨细胞的特异性标志酶,特异地分布于破骨细胞的胞浆。加入TRAP染色液后,细胞胞浆呈紫色或紫红色。
二. 实验步骤
1. 固定液恢复至室温,去离子水和TRAP工作液放在37℃水浴锅内预热;
2. 移除孔板内培养基,每孔加入200ul PBS洗一次;
3. 每孔加入固定液100ul,室温30sec移除;
4. 每孔加入200ul去离子水洗一次;
5. 每孔加入TRAP工作液100ul避光37℃(或室温)孵育15min-1h;
6. 每孔加200ul去离子水洗,3次;
7. 每孔滴入1滴甘油保存。